A quoi sert le diaphragme de champ et comment le régler correctement ?

Note: Le microscope doit posséder un éclairage de Köhler, sinon vous n’aurez pas de diaphragme de champ. Certains modèles de microscope d’entrée de gamme n’en possèdent pas ou sont pourvus d’un éclairage à LED. Dans ces cas de figures, ce qui suit ne s’applique pas à ces modèles.

Tout d’abord, le diaphragme de champ sert à contrôler la qualité de l’image observée car il influe sur de nombreux paramètres qui font que l’on obtient soit une image de très bonne qualité, soit une image de mauvaise qualité avec un réglage inapproprié. Ce diaphragme contrôle directement la résolution et le contraste d’un échantillon observé en microscopie à fond clair. Plusieurs paramètres sont liés: l’ouverture numérique, le pouvoir de résolution, la profondeur de champ et ce réglage est essentiel pour obtenir une bonne image.

Ensuite, ce réglage détermine la qualité de l’image finale: il est bon de s’exercer afin de trouver le réglage optimal pour chaque objectif. Il n’est pas possible de donner une indication sur ce que devrait être le réglage parfait, car cela dépend de facteurs tels que le type d’échantillon observé et le type d’objectif utilisé. Pour se faire une idée plus précise, le réglage du diaphragme de champ devrait être effectué entre 70 et 80% de l’ouverture totale de celui-ci, de manière à ce que l’on obtienne le meilleur compromis entre contraste et résolution.

D’une manière générale, il faut comprendre que le diaphragme de champ contrôle le diamètre de la zone éclairée de l’échantillon. De ce fait, si le diaphragme est trop fermé, la partie périphérique de l’échantillon n’est pas éclairée et inversement s’il est trop ouvert, des parties hors champ de l’échantillon sont éclairées. Pour régler correctement le diamètre de la zone éclairée de l’échantillon, on peut procéder comme ceci:

  • fermer le diaphragme jusqu’à ce que l’on observe l’image de ses contours dans le champ optique: une zone sombre apparait tout autour du champ d’observation.
  • mettre au point l’image obtenue avec les contours du diaphragme en agissant sur la molette de réglage de hauteur du condenseur.
  • une fois cette mise au point effectuée, réouvrir le diaphragme de champ jusqu’à ce qu’il circonscrive le champ d’observation (= il n’est plus visible)

Avec ce type de réglage, on est certain de n’éclairer que la partie captée par l’objectif et l’image présente un meilleur contraste et une meilleure résolution. Ce réglage peut être refait pour chaque objectif. Pour faire simple plus le grossissement (G ob.) de l’objectif est important et plus le diamètre de la zone à éclairée est petite et donc plus le diaphragme de champ est fermé.